Wykrywanie minimalnej choroby szczątkowej w białaczce u dzieci z reakcją łańcuchową polimerazy

Przegrupowanie zmiennej (różnorodność) i łączenie segmentów genów immunoglobuliny i receptora komórek T generuje unikalne sekwencje DNA w złączonym regionie tych segmentów genów. Ten region połączeń jest inny w każdej limfocytach. W przypadku genów immunoglobulin znany jest jako region III determinujący komplementarność (CDRIII) .1 Ponieważ nowotwór reprezentuje klonalną ekspansję pojedynczo transformowanej złośliwie komórki, węzłowe regiony przegrupowanych immunoglobulin i genów receptorów komórek T w białaczkach można uznać za swoiste dla nowotworu markery.2 3 4
Yamada i in. (Wydanie 16 sierpnia) 5 wykorzystywała amplifikację zależnych od guza łańcuchów immunoglobuliny immunoglobulin, w których pośredniczy łańcuchowa reakcja polimerazy, w celu wykrycia minimalnej rezydualnej choroby w ostrej białaczce limfoblastycznej z komórek prekursorowych B-dzieci (ALL). Być może nie docenili częstotliwości występowania prekursorowych limfocytów B w komórkach z wielokrotnymi rearanżacjami genu ciężkiego łańcucha immunoglobuliny i klonalną ewolucją schematów rearanżacji genu ciężkiego łańcucha immunoglobulin w nawrocie, co może prowadzić do fałszywie ujemnych wyników w wykrywaniu minimalnej choroby za pomocą technika reakcji łańcuchowej polimerazy CDRIII.
Figura 1. Figura 1. Analiza Southern Blot ciężkich łańcuchów immunoglobulin w komórkach białaczkowych w diagnostyce krwi obwodowej i w szpiku kostnym przy nawrocie pacjenta z prekursorem komórek B ALL. Kontrolne DNA i DNA z próbek komórek białaczkowych trawiono Bg / II lub kombinacją BamHI i Hindlll, rozdzielano zależnie od wielkości i przenoszono do nylonowych filtrów membranowych hybrydyzowanych z sondą JH znakowaną 32P.6 W obu trawieniach, trzy wyraźne prą.ki i jeden słabo uporządkowany prążek obserwowano w momencie rozpoznania, podczas gdy tylko jeden wyraźny i jeden słabo zmieniony prążek wykryto w nawrocie. Słaby pas wykryty w diagnozie był prawdopodobnie identyczny ze słabym pasmem przy nawrocie (G), ale wszystkie inne prążki różniły się wielkością w obu badaniach, co wskazuje, że oligoklonalność była obecna w momencie diagnozy, a ewolucja klonalna miała miejsce w nawrocie. Ciężary cząsteczkowe wyrażono w kilobazach.
Przeanalizowaliśmy 60 kolejnych przypadków prekursorowych komórek B z dzieciństwa na ich schematy przegrupowania genów ciężkiego łańcucha immunoglobuliny, stosując technikę Southern blot. W 43 procentach przypadków znaleźliśmy więcej niż dwa inaczej zmienione łańcuchy genu ciężkiego łańcucha immunoglobulin, które nie były związane z hiperdiploidalnością chromosomu 14 ani z innymi aberracjami tego chromosomu (dane niepublikowane). W 30 przypadkach porównaliśmy również schematy rearanżacji genu ciężkiego łańcucha immunoglobuliny w szpiku kostnym i krwi obwodowej uzyskane podczas diagnozy. W pięciu przypadkach (17 procent) zaobserwowaliśmy różnice we wzorcach przegrupowania (dane niepublikowane). Odkrycia te wskazują, że tworzenie subklonów prowadzące do oligoklonalności występuje często w ALL komórek prekursorowych. Ponadto badania porównawcze wzorców przegrupowania genów łańcucha ciężkiego immunoglobuliny w diagnostyce i nawrocie w 18 przypadkach wykazały, że ewolucja klonów w nawrocie była częstym zdarzeniem (50 procent) (dane niepublikowane). Przykład oligoklonalności obserwowanej podczas diagnozy i ewolucji klonów w nawrocie przedstawiono na rycinie 1.
Yamada i in stwierdził, że metoda reakcji łańcuchowej polimerazy CDRIII jest najbardziej realistyczna w przypadku linii B ALL z jednym lub dwoma stabilnymi przegrupowaniami genu łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, które, jak zakładali, reprezentują większość przypadków. Dlatego wybrali pacjentów z tylko jednym lub dwoma zmienionymi łańcuchami ciężkiego łańcucha immunoglobulin. Jednak u dwóch z ośmiu pacjentów znaleziono dodatkowe sekwencje CDRIII łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, których nie można było wyjaśnić wynikami ich badań metodą Southern blot. Najprawdopodobniej odkrycia te wynikały z obecności subklonów z odmiennie zmienionymi allelami łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, które były wykrywalne za pomocą metody łańcuchowej reakcji polimerazy, ale nie z techniką Southern blot (granica wykrywania, do 5 procent).
Heterogenność schematów rearanżacji genu ciężkiego łańcucha immunoglobulin w diagnostyce (oligoklonalność lub różnice między wynikami w szpiku kostnym i we krwi obwodowej) i przy nawrocie (ewolucja klonalna) będzie poważnie utrudniać wykrywanie minimalnej choroby resztkowej za pomocą amplifikacji za pośrednictwem reakcji łańcuchowej polimerazy specyficznych dla białka immunoglobulinowych regionów łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, ponieważ ta heterogeniczność będzie prowadzić do wyników fałszywie ujemnych w dużej proporcji (około 50 procent) przypadków prekursorowych komórek B-ALL. Nasze wstępne wyniki wskazują, że rearanżacje genu T-cell-receptor-. i genu-receptora-. w prekursorowym limicie komórek B są bardziej stabilnymi markerami niż zmiany w łańcuchach ciężkich immunoglobulin. . W związku z tym sugerujemy, że metoda reakcji łańcuchowej polimerazy regionu-receptora komórek T może być bardziej niezawodną techniką wykrywania minimalnej choroby w komórkach prekursorowych B-ALL, 3, 4, chociaż receptor-komórka-T-. lub Przegrupowania genu receptora T-cell-. występują tylko w 60 procentach przypadków tej choroby.6
A. Beishuizen, MD
Szpital Uniwersytecki Dijkzigt, 3000 DR Rotterdam, Holandia
K. Hählen, MD, Ph.D.
Szpital dziecięcy Sophia, 3038 GE Rotterdam, Holandia
ER van Wering, MD, Ph.D.
Holenderska Grupa Badawcza ds. Białaczki Dzieci, Haga, Holandia
JJM van Dongen, MD, Ph.D.
Szpital Uniwersytecki Dijkzigt, 3000 DR Rotterdam, Holandia
6 Referencje1. Davis MM, Bjorkman PJ. . Geny receptorów antygenów komórek T i rozpoznawanie limfocytów T. Nature 1988; 334: 395-402.
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Yamada M, Hudson S, Tournay O, i in. . Wykrywanie minimalnej choroby w krwiotwórczych nowotworach złośliwych pochodzących z linii komórek B przy użyciu sond specyficznych dla trzeciego regionu determinującego dopasowanie (CDR-III). Proc Natl Acad Sci USA 1989; 86: 5123-7.
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
3. d Auriol L, Macintyre E, Galibert F., Sigaux F.. Amplifikacja in vitro przegrupowań genu . T: nowe narzędzie do oceny minimalnej choroby resztkowej w ostrych białaczkach limfoblastycznych. Białaczka 1989; 3: 155-8.
Web of Science MedlineGoogle Scholar
4. Hansen-Hagge TE, Yokota S, Bartram CR. . Wykrywanie minimalnej choroby resztkowej w ostrej białaczce limfoblastycznej przez amplifikację in vitro przegrupowanych sekwencji łańcucha receptora komórek T Blood 1989; 74: 1762-7.
Web of Science MedlineGoogle Scholar
5. Yamada M, Wasserman R, Lange B, Reichard BA, Womer RB, Rovera G.. Minimalna choroba resztkowa u dzieci z bia
[więcej w: olx amstaff, dentysta na nfz wrocław, czy można biegać codziennie ]